結(jié)合樣品預(yù)處理技術(shù)，液相色譜所獲得的高分辨率、高靈敏度，使具有非常相似性質(zhì)的物質(zhì)的分離與同時(shí)測(cè)定成為可能，并使復(fù)雜相體中痕量組分的分離成為可能。隨著固定相的發(fā)展，液相色譜儀有可能在足夠的條件下完成生化物質(zhì)的分離以保持其活性。

 

　　液相色譜儀系統(tǒng)由儲(chǔ)液器、泵、采樣器、色譜柱、檢測(cè)器和記錄儀組成。累加器中的流動(dòng)相是高壓泵入系統(tǒng)，樣品溶液進(jìn)入流動(dòng)相，取樣器是流動(dòng)相在色譜柱（固定相），由于各種組件的樣品溶液兩個(gè)階段有不同的分配系數(shù)，相對(duì)運(yùn)動(dòng)的兩個(gè)階段，經(jīng)過(guò)幾次的吸附-解吸過(guò)程中，組件的分布在移動(dòng)速度上有很大的差異，將分離出的各個(gè)組分從柱狀逸出，通過(guò)檢測(cè)器，將樣品濃度轉(zhuǎn)換成電信號(hào)發(fā)送到記錄儀，數(shù)據(jù)以地圖的形式打印出來(lái)。

 

　　液相色譜儀的工作原理是流動(dòng)相在累加器是高壓泵入系統(tǒng)，樣品溶液進(jìn)入流動(dòng)相，取樣器是流動(dòng)相在色譜柱（固定相），由于各種組件的樣品溶液兩個(gè)階段有不同的分配系數(shù)，相對(duì)運(yùn)動(dòng)的兩個(gè)階段，經(jīng)過(guò)幾次的吸附-解吸過(guò)程中，各組分在移動(dòng)速度上的分布有很大的差異，從逸出的色譜柱中分離出各個(gè)組分，通過(guò)檢測(cè)器，將樣品濃度轉(zhuǎn)換成電信號(hào)發(fā)送到記錄儀，數(shù)據(jù)以地圖的形式打印出來(lái)。

 

　　LC液相色譜儀不適合溫度環(huán)境。通常，操作要求可在室溫下為5 ~ 35℃才能滿(mǎn)足。通常，濕度環(huán)境需要在20%到85%之間。在高濕度地區(qū)，當(dāng)使用某些類(lèi)型的氣相色譜儀時(shí)，由于環(huán)境濕度高，會(huì)降低氣相色譜儀的絕緣性能，如果操作靈敏度高，響應(yīng)值會(huì)降低。員工在使用氣相色譜儀時(shí)，遇到上述現(xiàn)象應(yīng)采取必要的措施。

 

　　液相色譜儀系統(tǒng)由儲(chǔ)液器、泵、采樣器、柱、檢測(cè)器和記錄儀組成。累加器中的流動(dòng)相是高壓泵入系統(tǒng)，樣品溶液進(jìn)入流動(dòng)相，取樣器是流動(dòng)相在色譜柱（固定相），由于各種組件的樣品溶液兩個(gè)階段有不同的分配系數(shù)，相對(duì)運(yùn)動(dòng)的兩個(gè)階段，經(jīng)過(guò)幾次的吸附-解吸過(guò)程中，組件的分布在移動(dòng)速度上有很大的差異，LC液相色譜儀從色譜柱中分離出單獨(dú)的組分，通過(guò)檢測(cè)器，將樣品濃度轉(zhuǎn)換成電信號(hào)發(fā)送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖形的形式打印出來(lái)。液相色譜儀主要包括采樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。

 

　　為L(zhǎng)C液相色譜儀進(jìn)樣口和檢測(cè)器類(lèi)型選擇柱尺寸和墊片材料；避免重復(fù)使用氣相色譜儀墊片；使用合適的切柱工具（如陶瓷板或金剛石刀）切柱；在氣相色譜柱安裝進(jìn)進(jìn)樣口和檢測(cè)器之前，確保色譜柱清潔平整；應(yīng)制造商要求安裝氣相色譜儀，并在進(jìn)氣口與檢測(cè)器之間的適當(dāng)距離插入色譜柱；氣相色譜柱必須置于色譜柱上，毛細(xì)管柱的任何部分不得接觸色譜柱壁。確保烘箱所有接頭在加熱前不漏水，載氣中無(wú)氧；通過(guò)注射檢查L(zhǎng)C液相色譜柱是否安裝正確，不保留化合物或使用氣相色譜儀軟件程序，并設(shè)置載氣的線(xiàn)性流量。

 

　　液相色譜儀的要求

 

　　1、流動(dòng)相在使用前必須用hplc級(jí)試劑進(jìn)行過(guò)濾，以去除顆粒雜質(zhì)和其他物質(zhì)（用0.45 m或更細(xì)的膜過(guò)濾）。

 

　　2、流動(dòng)相過(guò)濾后，應(yīng)采用超聲波除氣。脫氣后應(yīng)在室溫下使用。

 

　　3、不能使用純乙腈作為流動(dòng)相，這樣會(huì)使單向閥卡住，導(dǎo)致泵無(wú)法進(jìn)入液體。

 

　　4、使用緩沖液時(shí)，樣品完成后立即用去離子水沖洗管道和柱1小時(shí)，然后用甲醇（或甲醇水溶液）沖洗40分鐘以上，使離子*去除。對(duì)于柱塞棒的外部，樣品完成后也必須用20mL以上的去離子水沖洗。

 

　　5、長(zhǎng)時(shí)間不要使用本儀器，柱應(yīng)取出并用插頭密封保存。注意，由于純水易發(fā)霉，柱體不宜用純水保存，應(yīng)使用有機(jī)相（如甲醇等）保存。

 

　　6、液相色譜儀完成樣品后，用樣品中溶解的溶劑清洗取樣器。

 

　　7、C18柱不能用于蛋白質(zhì)樣品、血液樣品和生物樣品。

 

　　8、如果由于堵塞造成壓力過(guò)高，則在混合器管道過(guò)濾器單向閥中使用預(yù)柱過(guò)濾器進(jìn)行檢查和清洗。清洗方法：

 

　　9、氣泡會(huì)造成不穩(wěn)定的壓力和較差的重現(xiàn)性，所以在使用過(guò)程中盡量避免氣泡。

 

　　10、如果進(jìn)液管內(nèi)沒(méi)有液體，LC液相色譜儀應(yīng)使用注射器吸液：通常在輸液前應(yīng)清洗流動(dòng)相。

 

　　11、液相色譜儀注意液相色譜柱的pH值范圍。不要注入強(qiáng)酸或強(qiáng)堿樣品，特別是堿性樣品。

 

　　12、更換移動(dòng)相時(shí)，吸濾頭應(yīng)放置在燒杯內(nèi)，振動(dòng)時(shí)清洗，然后插入新的移動(dòng)相。非混相流動(dòng)相應(yīng)改為異丙醇。